Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ)

Программа семинара:

1. Что такое хроматография и хроматографический процесс.
2. Классификация методов разделения в химическом анализе.
3. Причины быстрого развития ВЭЖХ и ее преимущества перед другими видами анализа.
4. Области применения ВЭЖХ.
5. Общая схема хроматографического разделения и жидкостного хроматографа.
6. Мировые производители жидкостных хроматографов. Рейтинг, виды программного обеспечения.
7. Классификация видов высокоэффективной жидкостной хроматографии и типы хроматографических систем в ВЭЖХ.
8. Скоростная хроматография быстрого разрешения (RRLC или UPLC) как последнее достижение хроматографической науки для оптимизации методики.
9. Адсорбционная хроматография и ее виды, преимущества и недостатки.
10. Нормально-фазовая хроматография.
11. 11. Обратно-фазовая хроматография, ее преимущества и недостатки, сравнение с нормально-фазовой хроматографией.
12. 12. Другие виды ВЭЖХ (краткий обзор).
13. 13. Хроматография с гидрофильным взаимодействием (HILIC).
14. 14. Хроматография с переносом заряда (charge-transfer HPLC).
15. 15. Механизм хроматографического разделения в колонке. Варианты поведения веществ.
16. 16. Механизмы удерживания и типы взаимодействия между аналитом, сорбентом и растворителем ВЭЖХ.
17. 17. Хроматографический пик и его характеристики.
18. 18. Коэффициент емкости (фактор удерживания k ').
19. 19. Селективность (относительное содержание), критерии фактора емкости.
20. 20. Число теоретических тарелок (эффективность хроматографической системы). Причины ухудшения эффективности.
21. 21. Фактор разрешения Rs и его связь с коэффициентом емкости, селективностью и эффективностью.
22. 22. Асимметрия пика, причины возникновения, пути улучшения формы пика.
23. 23. Перегрузки хроматографической колонки, причины и последствия.
24. 24. Изократическое и градиентное элюирование. Преимущества и недостатки.
25. 25. Виды градиентных систем. Построение градиентов.
26. 26. Влияние температуры на селективность и эффективность разделения в ВЭЖХ.
27. 27. Силикагель. Его структура и химия.
28. 28. Неподвижные фазы для ВЭЖХ. Новые направления при их разработке; силикагели типов А и В, золь-гель технологии.
29. 29. Сорбенты для обратно-фазной ВЭЖХ. Методы создания модифицированных фаз. Селективность фаз С18.
30. 30. Наиболее распространены привитые фазы.
31. 31. Классификация фаз С18 по содержанию углерода.
32. 32. Устойчивость привитых силикагелей при высоких и низких значениях рН.
33. 33. Адсорбенты, которые базируются на силикагеле.
34. 34. Высокотемпературная ВЭЖХ.
35. 35. Эквивалентность хроматографических колонок.
36. 36. Энд-кэппинг и двойной энд-кэппинг. Их влияние на способность разделения.
37. 37. Насосы для ВЭЖХ. Плунжерный насос. Градиентные насосы со смешиванием в области высокого и низкого давления. Правила работы с насосной системой.
38. 38. Хроматографические колонки:
    • принцип действия хроматографических колонок;
    • понятие о пустом объеме;
    • влияние размера частиц на эффективность колонок и на величину давления;
    • типы хроматографических колонок;
    • подготовка колонки;
    • нагрузка на колонку;
    • скорость потока подвижной фазы;
    • давление на входе в колонку;
    • стабильность сорбента в колонке;
    • передколонки, требования к ним, частота замены;
    • другие способы защиты аналитической колонки от загрязнений;
    • профилактические мероприятия для поддержания колонки в рабочем состоянии;
    • хранение и ремонт колонок для ВЭЖХ;
    • диапазоны рН для хроматографических колонок;
    • профилактические мероприятия для поддержания работоспособности хроматографической колонки;
    • требования к помещению для работы с жидкостным хроматографом;
    • регенерация колонок для ВЭЖХ, схемы регенерации для различных видов хроматографических колонок (обратно-фазные, HILIC, циано, ионообменные и др.);
    • как продлить срок службы хроматографической колонки;
    • правила эксплуатации обратно-фазовой колонки;
    • параметры контроля качества колонки.
39. 39. Проблемы воспроизводимости между параллельными вводами проб.
40. 40. Продвижение фазы:
    • роль подвижной фазы в процессе ВЭЖХ;
    • элюирующая сила и селективность как основные характеристики подвижных фаз;
    • выбор силы элюирования подвижной фазы, треугольник селективности Снайдера;
    • растворитель для ВЭЖХ, требования к ним, преимущества и недостатки;
    • величина рН подвижной фазы;
    • ион сила подвижной фазы;
    • подготовка элюента;
    • хранение подвижных фаз, рекомендуемые сроки;
    • модификаторы подвижных фаз, их роль в хроматографическом процессе, виды модификаторов, свойства наиболее распространенных модификаторов.
41. 41. Органические растворители для приготовления подвижных фаз и пробподготовки. Требования к ним, правила работы, чистота, ассортимент.
42. 42. Фильтрация элюента при пробподготовке.
43. 43. Роль буферных растворов в составе подвижных фаз.
44. 44. Дегазация элюента. Виды дегазации. Сравнительная характеристика по эффективности. Особенности работы с водными растворителями.
45. 45. Вода для высокоэффективной жидкостной хроматографии. Получения. Требования. Хранения.
46. 46. Пробподготовка в высокоэффективной жидкостной хроматографии. Цели. Рекомендации по выбору растворителя.
47. 47. Химическая дериватизация компонентов пробы.
48. 48. Детекторы в ВЭЖХ. Их сравнительная характеристика. Преимущества и недостатки.
49. 49. Базовая линия, высокочастотные и низкочастотные шумы, соотношение сигнал-шум, дрейф базовой линии.
50. 50. Основные приемы проведения качественного анализа по данным ВЭЖХ. Спектральные соотношения пиков. Ложно положительные и ложно отрицательные результаты.
51. 51. Основные приемы проведения количественного анализа по данным ВЭЖХ.
52. 52. Примеры расчетных формул, применяемых в количественном анализе ВЭЖХ для различных лекарственных форм.
53. 53. Статистическая обработка полученных результатов.
54. 54. Системы хранения хроматографической системы, выбор критериев, примеры. Критерии разделяющей способности хроматографической системы.
55. 55. Некоторые проблемные ситуации и пути решения.
56. 56. Виды взаимодействий на обратно-фазной С18 поверхности и методы очистки колонок С18 в зависимости от структуры аналита и вида взаимодействия.
57. 57. Проблемы интеграции плохо разделяемых пиков и разметка хроматограмм.
58. 58. Защитные крышки (SEQURITY CAPS) при пробподготовке.
59. 59. Классификация хроматографических колонок по материалу наполнения в соответствии с требованиями UPS текущего издания (справочная информация отдельным приложением).

Время проведения семинара: 10:00-17:00

Докладчик: Илья Кейтлин, Кандидат фармацевтических наук, специалист в области фармацевтического анализа.